2.3. Создание AdV-GDNF и трансдукция ККП

Рекомбинантные аденовирусы Ad5-GDNF и Ad5-EGFP, кодирующие гены GDNF и EGFP соответсвенно, получены от д.б.н. Ризванова А.А., институт фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета (Черенкова и др. 2012).

Для получения рекомбинантных аденовирусов Ad5-GDNF и Ad5-EGFP кольцевые плазмидные векторы pAd-GDNF и pAd-EGFP подвергали рестрикции ферментом PacI. Линейными формами данных плазмид трансфицировали клетки линии HEK 293A с помощью трансфекционного агента TurboFect.

Клеточная линия 293A является субклоном клеточной линии 293 содержит стабильно интегрированную копию гена Е1, которая поставляет белки Е1 (Е1А и Е1В), необходимые для создания рекомбинантного аденовируса. На 7-е сутки после трансфекции суспензию зараженных клеток линии HEK 293A подвергали нескольким циклам замораживания /оттаивания. После центрифугирования, полученным супернатантом, содержащим вирусные частицы, инфицировали ККП.

Назад | Оглавление | Вперед

Дата публикации (обновления): 12 февраля 2017 г. 20:19

.

	Жизнь после травмы спинного мозга