2.1.4. Клетки крови пуповины человека (ККП)

Клетки крови пуповины человека для экспериментов по генно клеточной терапии получали из Банка стволовых клеток КГМУ. Выделение мононуклеарной фракции клеток крови пуповины человека осуществляли в градиенте фиколла по методу I.J. Fuss (Rizvanov et al. 2008). Выделенные клетки трансфицировали путем электропорации плазмидой pBud-VEGF- FGF2 для введения животным 8-й опытной группы (Таб. 3). Сразу после нанесения травмы трансфицированные клетки инъецировали по 1 млн в 5 мкл DPBS (БиолоТ) в 2 точки на расстоянии 1 мм ростральнее и каудальнее эпицентра травмы и 0,5 мм латеральнее срединной линии при помощи гамильтоновского шприца (Sigma). Животным 7-й контрольной группы (Таб. 3) в тех же условиях и в том же количестве вводили аналогичные клетки, трансфицированные плазмидой pEGFP (Clontech), содержащей ген улучшенного зеленого флюоресцентного белка (EGFP). В опытах с прямой генной терапией в тех же экспериментальных условиях крысы 10-й опытной группы (Таб. 3) получали 40 мг плазмиды pBud-VEGF-FGF2, животным 9-й контрольной группы (Таб. 3) вводили плазмиду pEGFP.

Генетическая конструкции pBud-VEGF-FGF2 получена от д.б.н. Ризванова А.А. (институт фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета). Конструкция создана на основе коммерческой плазмиды pBudCE4.1, одновременно и независимо экспрессирует факторы роста VEGF и FGF2. Эффективность экспрессии подтверждена методами ПЦР в реальном времени, вестернблот и иммуногистохимическими (Салафутдинов и др. 2010). В течение 7 суток после операции всем экспериментальным животным внутримышечно вводили гентамицин (5 мг/кг) один раз в сутки.

Рис. 7. Двухкассетный экспрессионный вектор способен одновременно и независимо экспрессировать два терапевтических гена: VEGF165 и FGF2

Рис. 8. Схема эксперимента с трансплантацией ККП трансфицированных плазмидой pBud-VEGF-FGF2

Назад | Оглавление | Вперед

Дата публикации (обновления): 11 февраля 2017 г. 14:12

.

	Жизнь после травмы спинного мозга